注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人真淋巴上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

葡萄球菌選擇性瓊脂110號(hào)/CHAPMAN瓊脂/貝爾德-帕克瓊脂110號(hào)/Staphylococcus Selective Agar 0/Baird Parker Agar 10用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

大鼠腎細(xì)胞小鼠肥大細(xì)胞細(xì)胞

EA.hy926(人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白英文名稱：Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

金色鏈霉菌 Streptomyces aureus凝結(jié)芽孢桿菌 Bacillus coagulans

人胃粘膜上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（高分化）

血管生長(zhǎng)素(ANG)重組蛋白英文名稱：Recombinant Angiogenin (ANG)

HAN(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)重組蛋白英文名稱：Recombinant Erythropoietin Receptor (EPOR)

克柔念珠菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞小鼠腺

中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii異常漢遜酵母 Hansenula anomala

胃泌素(GT)重組蛋白  Recombinant Gastrin (GT)

含卷螺旋域蛋白3(CCDC3)重組蛋白  Recombinant Coiled Coil Domain Containing Protein 3 (CCDC3)

FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白  Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)

無花果曲霉 Aspergillus ficuum泡盛曲霉 Aspergillus awamori

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

波形蛋白(VIM)重組蛋白  Recombinant Vimentin (VIM)

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞  BHK

蘇云金芽胞桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki

苜蓿中華瘤菌凝結(jié)芽孢桿菌 Bacillus coagulans

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。